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预混合饲料中维生素A乙酸酯、维生素D3、维生素E的测定——高效液相色谱法

本方法适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混料饲料、维生素预混合饲料维生素A及维生素D、维生素E的测定。参考标准GB/T17817-2010《饲料中维生素A的测定高效液相色谱法》、 GB/T 17818-2010 《饲料中维生素D3的测定高效液相色谱法》、GB/T 17812-2008 《饲料中维生素E的测定高效液相色谱法》。

 

1、方法原理    

维生素预混料中的维生素A乙酸酯、维生素D3、维生素E(dl-α-生育酚乙酸酯)用甲醇溶液提取,试液注入高效液相色谱柱,用紫外检测器在275 nm处测定,外标法计算维生素A、维生素D3、维生素E(dl-α-生育酚乙酸酯)含量。

 

2、主要仪器设备

    1)高效液相色谱仪L210,带紫外检测器(上海仪电分析仪器有限公司);

    2)超声波水浴;

    3)电子天平;

    4)真空抽滤装置。

 

3、实验方法

1、混合标样配置

维生素A乙酸酯、维生素D3、维生素E(dl-α-生育酚乙酸酯)标准贮备液:准确称取维生素A乙酸酯、维生素D3、维生素E (dl-α-生育酚乙酸酯)各10。0 mg,置于100 mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解并稀释到刻度,混匀,4℃下保存。该贮备液浓度为0。1 mg/mL。

维生素A乙酸酯、维生素D3、维生素E(dl-α-生育酚乙酸酯)混合标准工作液:准确吸取各标准贮备液若干毫升于10 mL棕色容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,混匀。

2、试样溶液的制备

称取试样1.00 g置于100 mL棕色容量瓶中,加入约80 mL甲醇,于 65 ℃超声波水浴中超声提取30 min,冷却至室温,用甲醇稀释至刻度,充分摇匀后过0.45 μm滤膜过滤。将试样溶液进一步稀释至合适浓度,用于实验分析。

3、高效液相色谱仪参考条件

色谱柱:C18 4。6 mm(i。d)×150mm;

流动相:95%甲醇

流速:1 mL/min;

柱温:室温

波长:275 nm;

测定:取相同体积试样制备液和标准使用液分别注入高效液相色谱仪,根据保留时间按定性,外标峰面积法定量。

 

4、实验结果

4.1 混合标准溶液高效液相色谱图

 

1。维生素A乙酸酯   2。维生素D3   3。维生素E

 

4.2工作曲线的绘制

        维生素A乙酸酯工作曲线见下图,线性相关系数:0.9998

维生素D3工作曲线见下图,线性相关系数:0.9998

维生素E工作曲线见下图,线性相关系数:0.9992

4.3预混料实际样品色谱图

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